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DNA-Isolierung aus Mundschleimhaut

Details: Veröffentlicht am Sonntag, 10. Juli 2011 00:00; Geschrieben von Manfred Seidl

Versuchsbeschreibung:

In einem Reagenzglas wird Mundschleimhaut mit einem Lysepuffer versetzt, erhitzt und mit eiskaltem Ethanol überschichtet.

Verwendete Chemikalien:

Chemikalie	Symbole	EUH- / H- / P-Sätze	Menge
Natriumlaurylsulfat, C₁₂H₂₅NaO₄S Synonyme: Dodecylsulfat Natriumsalz, Natriumdodecylsulfat, Schwefelsäuredodecylester-Natriumsalz M: 288.37 g/mol CAS-Nr.: 151-21-3 EG-Nr.: 205-788-1 WGK: 2	Gefahr	H228: Entzündbarer Feststoff. H302: Gesundheitsschädlich bei Verschlucken. H311: Giftig bei Hautkontakt. H315: Verursacht Hautreizungen. H319: Verursacht schwere Augenreizung. H335: Kann die Atemwege reizen. P210: Vor Hitze schützen. P280: Schutzhandschuhe tragen. P302 + P352: BEI KONTAKT MIT DER HAUT: Mit viel Wasser und Seife waschen. P304 + P340: BEI EINATMEN: An die frische Luft bringen und in einer Position ruhigstellen, die das Atmen erleichtert. P305 + P351 + P338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen. P309 + P310: BEI Exposition oder Unwohlsein: Sofort GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen.	0.1g
Ethanol 96% vergällt, C₂H₆O Synonyme: Alkohol, Weingeist, Ethylalkohol, Sprit M: 46.07 g/mol CAS-Nr.: 64-17-5 EG-Nr.: 200-578-6 WGK: 1	Gefahr	H225: Flüssigkeit und Dampf leicht entzündbar. P210: Von Hitze/Funken/offener Flamme/heißen Oberflächen fernhalten. Nicht rauchen.	6-7mL

Chemikalie

Symbole

EUH- / H- / P-Sätze

Menge

Natriumlaurylsulfat, C₁₂H₂₅NaO₄S

Synonyme: Dodecylsulfat Natriumsalz, Natriumdodecylsulfat, Schwefelsäuredodecylester-Natriumsalz
M: 288.37 g/mol

CAS-Nr.: 151-21-3
EG-Nr.: 205-788-1

WGK: 2

Strukturformel Natriumlaurylsulfat

GHS 02 - Flamme

GHS 06 - Totenkopf mit gekreuzten Knochen

Gefahr

H228: Entzündbarer Feststoff.

H302: Gesundheitsschädlich bei Verschlucken.

H311: Giftig bei Hautkontakt.

H315: Verursacht Hautreizungen.

H319: Verursacht schwere Augenreizung.

H335: Kann die Atemwege reizen.

P210: Vor Hitze schützen.

P280: Schutzhandschuhe tragen.

P302 + P352: BEI KONTAKT MIT DER HAUT: Mit viel Wasser und Seife waschen.

P304 + P340: BEI EINATMEN: An die frische Luft bringen und in einer Position ruhigstellen, die das Atmen erleichtert.

P305 + P351 + P338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen.

P309 + P310: BEI Exposition oder Unwohlsein: Sofort GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen.

0.1g

Ethanol 96% vergällt, C₂H₆O

Synonyme: Alkohol, Weingeist, Ethylalkohol, Sprit
M: 46.07 g/mol

CAS-Nr.: 64-17-5
EG-Nr.: 200-578-6

WGK: 1

GHS 02 - Flamme

Gefahr

H225: Flüssigkeit und Dampf leicht entzündbar.

P210: Von Hitze/Funken/offener Flamme/heißen Oberflächen fernhalten. Nicht rauchen.

6-7mL

Verwendete Geräte, Versuchsaufbau:

Plastikbecher, Reagenzglas mit Gummistopfen, Reagenzglasständer, 2x 10mL Messzylinder, 100mL Becherglas, Glasgewindeflasche, Einwegpipette (1,5 oder 3mL), Schnappdeckelglas, Wasserbad, Gefrierschrank (-20 °C), Permanentmarker wasserunlöslich

Reaktionsgleichung:

entfällt

Erklärung:

Die DNA bzw. DNS (Desoxyribonucleinsäure) befindet sich in den Chromosomen im Zellkern. Die DNA ist auf Histon-Moleküle aufgewickelt.

Der Lysepuffer (griech. lysis = auflösen) löst die Zell- und Zellkernmembran auf ebenso die Histon-Moleküle. Die Salzionen lagern sich an die DNA an und verringern ihre Löslichkeit.

Die DNA umgibt sich mit einer »Wasserhülle«. Das zugesetzte Ethanol entzieht der DNA diese Hülle, die DNA-Moleküle lagern sich zusammen.

Wird das Reagenzglas nun langsam auf den Kopf gedreht, dann durchmischt das Ethanol die Lösung, was die Löslichkeit der DNA noch weiter herabsetzt: Die DNA-Moleküle lagern sich noch stärker zusammen.

Versuchsdurchführung:

Vorbereitung:

In eine Glasgewindeflasche werden 20mL Ethanol gegeben und bei -20 °C in den Gefrierschrank gestellt. Der Kühlprozess dauert ca. 2-3 Stunden.
In das Reagenzglas werden 14mL Wasser gegeben und der Flüssigkeitsstand mit dem Permanentmarker gekennzeichnet.
Das Wasserbad wird auf eine Temperatur von 50 °C eingestellt.
Lysispuffer: In ein 100mL Becherglas werden 9.9g Wasser eingewogen und 0.1g Natriumlaurylsulfat zugesetzt. Nun wird so lange umgeschwenkt, bis sich das Natriumlaurylsulfat gänzlich gelöst hat.

In das Reagenzglas werden 3mL Wasser gefüllt und das Reagenzglas in den Ständer gestellt.

Nun werden die Wangen in den Mund gesogen und 30 Sekunden auf den Wangeninnenseiten gekaut. Nicht schlucken!

Das Wasser aus dem Reagenzglas wird nun in den Mund genommen und 30 Sekunden lang kräftig im Mund bewegt. Nicht schlucken!

Die Flüssigkeit wird in einen Plastikbecher überführt. Der Rand des Bechers wird zu einem Ausguss zusammengedrückt und die Flüssigkeit in das Reagenzglas gegossen.

Jetzt werden 2mL Lysispuffer zugegeben, der Stopfen aufgesetzt und das Reagenzglas 5x langsam auf den Kopf gedreht.

Das Reagenzglas wird nun für 10 Minuten im Wasserbad bei 50 °C belassen.

Nun wird das Reagenzglas schräg gehalten und so viel eisgekühltes Ethanol hinzu pipettiert, bis die Markierung erreicht ist.

Der Stopfen wird wieder aufgesetzt und das Reagenzglas für 5 Minuten im Reagenzglasständer belassen. Beobachten!

Danach wird das Reagenzglas wieder 5x langsam auf den Kopf gedreht.

Die ausgefallene DNA kann nun mit einer Einwegpipette vorsichtig abgesaugt und in ein Schnappdeckelglas gegeben werden. Es empfiehlt sich, die DNA mit Ethanol zu überschichten.

Bild-Quelle: Chromosom (Wikipedia)